Tema: Un novedoso ensayo de PCR cuantitativa para la detección de Streptococcus pneumoniae utilizando el objetivo del gen regulador de competencia comX
Objetivo: Crear un nuevo método de detección de Streptococcus pneumoniae en hemocultivos para así desarrollar un tratamiento oportuno con antibióticos apropiados.
Muestra: suero
Tipo de ácido nucleico a ser extraído: ADN bacterial
Extraccion de ADN:
- Lisis: se procesó de acuerdo con las instrucciones del fabricante, se eluyó en 50 μl de agua sin ADNsa (Sigma) y se almacenó a -20 ° C hasta su uso posterior.
- Purificación: kit MagNA Pure 96 DNA y Viral NA Small Volume
- Separación: kit MagNA Pure 96 DNA y Viral NA Small Volume
Gen a amplificar: lytA y comX
Número de pares de bases: 76 pb para lytA- CDC y 170 pb para comX
Tipo de PCR: PCR cuantitativa
La PCR se realizó en el 7500 PCR en tiempo real (Applied Biosystems) con los siguientes parámetros de ciclo: 10 min a 95 ° C
50 ciclos de 95 ° C durante 15 s
60 ° C durante 1 min.
La PCR se analizo utilizando 7500 Fast Systems Software (Applied Biosystems), con un umbral de 220 436 unidades de fluorescencia relativas (RFU) para comX y 86 559 RFU para lytA
Visualización: Amplicones en equipo de detección y fotografía.
Sensibilidad: lytA -CDC fue del 103% y fue del 97% para comX
Especificidad: especificidad analítica del 100%.
Referencia bibliografica:
